Scooby-Doo est accompagné, voire plutôt poussé, par ses acolytes humains dans le métier de pseudo-détective et se retrouve souvent dans des situations cocasses. La bande de pseudo-détectives est composée de :
Norville Rogers alias Shaggy ou Sammy : le peureux, stéréotype du beatnik, toujours affamé.
Fred Jones : le beau gosse baraqué qui concocte les dispositifs pour piéger les méchants.
Daphné Blake : la belle idiote toujours prête à se fourrer dans un mauvais pas.
Véra Dinkley : l'intellectuelle à lunettes capable de résoudre tous les problèmes techniques.
Ils essayent de résoudre des affaires mystérieuses où des monstres et autres effets d'épouvante sont récurrents et qui s'avèrent être, dans le contexte de l'épisode, un méchant en costume. Scooby-Doo se retrouve généralement avec Sammy ; tous les deux sont très peureux et cherchent continuellement à se rassurer. Lorsque survient le moindre événement anormal, ils s'enfuient en catastrophe,